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En la cuarta etapa, vamos a invertir nuestros iniciales de entrecruzamiento proteínas al ADN, seguido de
la purificación del ADN. Empieza por tomar cada muestra de IP, así como la muestra de entrada que
no seguir los pasos anteriores IP y añadir 8 microlitros de sodio 5 molar
cloruro a los 200 microlitros de muestras seguido de agitación con vórtex.
Incubar a 95 grados Celsius durante 15 minutos. Para purificar cada muestra se utilizará una columna de sílice de unión al ADN de acuerdo
a las instrucciones del fabricante. Primero se debe agregar cada muestra para las cantidades adecuadas
de tampón de unión a ADN en vórtice, a continuación, transferir cada muestra a una columna colocada dentro de una
tubo de recogida. Centrifugar las columnas a 15.000 g durante 1 minuto.
Desechar el flujo a través del tubo de extracción y añadir tampón de ADN de lavado para cada columna.
Centrifugar las columnas a 15000G durante un minuto. Desechar el flujo a través del tubo de extracción
y girar las columnas vacías en 15000G durante dos minutos para asegurarse de asegurarse de que estén completamente secos.
Desechar el tubo de recogida de edad y colocar la columna de purificación en un tubo limpio nuevo.
Añadir 50 microlitros de tampón de elución de ADN directamente a la membrana de la columna.
Dejar reposar durante un minuto y luego realizar un giro final en 15000G durante 1 minuto.
Desechar la columna de purificación y guardar el ADN purificado a -20 grados Celsius hasta el momento de la última fase.