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Bienvenido a la Serie Protocolo Novus Visual.
En este episodio le mostramos cómo realizar todas las fases del fluorescente
inmunocitoquímica, utilizando los métodos más comunes para este ensayo.
Antes de comenzar el procedimiento de la CPI,
vamos a demostrar cómo preparar cubreobjetos y platos de cultivo celular
seguido por el forro de nuestras células.
Comenzamos el tratamiento de ácido cubreobjetos nuevos en un molar de ácido clorhídrico para
24 horas.
Después de decantar cuidadosamente el ácido y la eliminación de los cubreobjetos de vidrio,
nos lavamos cada una con agua destilada,
luego un enjuague final con etanol.
Como paso opcional se puede colocar el cubreobjetos sumergirse en un estante subbing
en un 0,1 mg / ml de solución de gelatina o polilisina
durante cinco minutos.
Estos recubrimientos ayudante para proporcionar adherencia adicional de las células a la
cubreobjetos de garantizar que no se separan durante las etapas de lavado posteriores.
Después del tratamiento retirar la parrilla subbing y secar los cubreobjetos en la cultura
campana o en un horno caliente.
Limpieza cubreobjetos secos se insertan entonces en cada pocillo de un pocillo de cultivo seis
placa
y cubierto con una tapa.
Para ahorrar tiempo, grandes cantidades de platos se pueden preparar con anticipación para su uso posterior.
Las placas también se pueden esterilizar por su inclusión en la luz UV de la campana.
Con cubreobjetos limpios preparados en placas de seis pocillos, ahora podemos añadir nuestras células.
Platted aquí en las células de añadir una densidad de un medio millón de células por pocillo.
Después las células se cultivaron durante la noche en la incubadora o hasta que alcanzan su preferida
densidad.